Isocratic là gì

HPLC là chữ viết tắt 4 vần âm đầu bằng giờ đồng hồ Anh của cách thức sắc đẹp cam kết lỏng tính năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trước đó Gọi là phương thức dung nhan ký kết lỏng cao thế (High Pressure Liquid Chromatography).

Bạn đang xem: Isocratic là gì


1.Khái niệmPhương pháp dung nhan ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Thành lập và hoạt động năm 1967-1968 trên cơ sở trở nên tân tiến với cải tiến tự cách thức sắc cam kết cột cổ điển. HPLC là một trong những phương pháp phân chia bóc tách trong những số ấy trộn động là hóa học lỏng cùng pha tĩnh cất vào cột là hóa học rắn đã làm được phân chia bên dưới dạng đái phân hoặc một hóa học lỏng khóa lên một chất có rắn, hay một hóa học có đã được đổi mới bởi link hóa học với những đội chức cơ học. Phương pháp này ngày càng được sử dụng thoáng rộng cùng thông dụng do nhiều lý do: gồm độ nhạy cao, kỹ năng định lượng tốt, thích hợp tách bóc các hòa hợp chất cạnh tranh cất cánh khá hoặc dễ phân bỏ nhiệt.Phạm vi áp dụng của phương pháp HPLC rất rộng lớn, nlỗi đối chiếu những vừa lòng chất dung dịch trừ sâu, thuốc phòng sinc, những hóa học phú gia thực phẩm trong lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm, môi trường…2.Phân loạiDựa vào sự không giống nhau về cơ chế tách bóc chiết sử dụng vào HPLC, fan ta phân tách HPLC thành 4 loại:

Sắc ký dung nạp xuất xắc sắc ký kết lỏng rắn (adsorption/liquid chromatography). Sắc ký phân bố (partition chromatography). Sắc cam kết ion (ion chromatography). Sắc ký rây phân tử (kích thước exclusion/gel permeation chromatography).

Trong số đó, sắc cam kết phân bổ (SKPB) được ứng dụng những tốt nhất vì chưng có thể so với được phần nhiều hòa hợp hóa học trường đoản cú không phân rất đến những hòa hợp chất siêu phân rất, thích hợp hóa học ion bao gồm cân nặng phân tử không quá Khủng (SKPB được chia thành nhì nhiều loại dựa vào độ phân rất kha khá thân trộn tĩnh và pha động: sắc ký kết trộn thường xuyên – SKPT (normal phase chromatography) và nhan sắc ký pha đảo – SKPĐ (reversed phase chromatography).Trong SKPT, pha tĩnh sử dụng bao gồm độ phân rất cao hơn nữa pha động. Pha tĩnh nhiều loại này sẽ có ái lực cùng với các thích hợp chất phân rất. SKPT dùng làm bóc tách với đối chiếu những hợp chất bao gồm độ phân rất cao với phân tử lượng thanh mảnh lắm.SKPĐ là thuật ngữ nhằm duy nhất nhiều loại nhan sắc cam kết trong số ấy trộn tĩnh ít phân cực hơn trộn đụng. Phương thơm pháp này cần sử dụng so với các đúng theo chất từ ko phân cực đến phân cực. Hầu hết các đúng theo chất cơ học gồm mạch carbon dài (ít phân cực) khôn cùng tương thích mang đến đối chiếu bằng SKPĐ. Dung môi thực hiện trong SKPĐ là các dung môi phân rất, trong các số ấy dung môi nước đóng vai trò đặc biệt quan trọng và lại thấp chi phí. Do kia, SKPĐ được vận dụng các với thông dụng rộng SKPT.3. Pha tĩnh trong sắc ký trộn đảo Trong dung nhan ký kết phân bổ nói bình thường, pha tĩnh là rất nhiều vừa lòng chất hữu cơ được gắn thêm lên chất mang rắn silica hoặc cấu thành từ bỏ silica theo nhì kiểu:

Pha tĩnh được giữ giàng bên trên chất sở hữu rắn bằng bề ngoài tiêu thụ đồ vật lý → nhan sắc ký kết lỏng-lỏng (liquid-liquid chromatography). Pha tĩnh links hóa học với chất nền → sắc cam kết trộn links (bonded phase chromatography)Trong quá trình thực hiện, tín đồ ta phân biệt sắc đẹp ký kết trộn liên kết có rất nhiều ưu thế rộng sắc ký kết trộn lỏng-lỏng vì chưng một vài nguyên ổn nhân sau: Pha tĩnh trong hệ dung nhan ký lỏng-lỏng dễ dẫn đến phối hợp vị pha đụng đề xuất dễ bị mất đuối trộn tĩnh trong thời hạn thực hiện cùng tạo lây nhiễm đối với phù hợp hóa học so sánh. Do pha tĩnh của nhan sắc ký kết lỏng-lỏng dễ rã vào trộn hễ bắt buộc tín đồ ta tất yêu áp dụng phương thức cọ giải gradient dung môi.

Vì vậy, người ta hay chỉ quyên tâm mang lại nhiều loại dung nhan ký kết phân bổ pha liên kết với phần nhiều các loại cột sử dụng hiện giờ vào nhan sắc ký kết phân bổ đều phải có kết cấu dạng này.Bề mặt những phân tử silica – SiO2 (những hạt này còn có đường kính 3, 5 hoặc 10 µm) được xử trí (tbỏ phân) bằng cách đun cho nóng với HCl 0,1M trong một hoặc nhị ngày nhằm tạo nên đa số nhóm SiOH nlỗi sau (thông thường chỉ có khoảng 8 µmol SiOH/mét vuông bề mặt):


*

Sau đó mặt phẳng silica sẽ thủy phân này sẽ được cho phản nghịch ứng cùng với các organochlorosilan để tạo thành các trộn tĩnh không phân rất, phân rất vừa phải hoặc khôn cùng phân cực tùy thuộc vào đội R đã tích hợp.


*

Thường chỉ tầm một nửa nhóm –OH mất H+ để tạo nên HCl (tức Hợp chất buộc phải phân tích lúc trải qua trộn tĩnh có khả năng sẽ bị cất giữ vì chưng phần đông lực lượng hệ trọng không giống nhau tùy thuộc tính chất, Đặc điểm của chất rã và pha tĩnh.Trong SKPĐ, nhóm nuốm R vào hợp chất siloxan phần lớn ko phân rất hoặc ít phân rất. Đó là các ankyl dây tương đối dài nlỗi C8 (n-octyl), C18 (n-octadecyl) nói một cách khác là ODS (octadecylsilan) hoặc những team alkyl nđính hơn hẳn như C2; hơn nữa còn có cyclohexyl, phenyl trong các số ấy đội phenyl gồm độ phân cực cao hơn team alkyl. Người ta nhận ra các alkyl dây dài đến công dụng tách ổn định rộng các nhiều loại không giống đề nghị đây là các loại được thực hiện những nhất.


*

Tuy nhiên bởi cảm giác lập thể buộc phải vào cấu tạo của trộn tĩnh còn nhóm –OH chưa phản bội ứng, khiến ảnh hưởng xấu mang đến quy trình tách bóc sắc ký tùy môi trường thiên nhiên pH đối chiếu.Trong môi trường quá acid (pH Trong môi trường xung quanh baz (pH > 7), thiết yếu nền silic có trộn tĩnh hoàn toàn có thể bị hài hòa (SiO2 thành silicat), hệ quả là N sút và số nhánh ghép cũng giảm, mũi rộng lớn ra cùng thời hạn giữ cũng rất có thể giảm. Kết quả đối chiếu điều đó sẽ không đủ độ đúng mực.Một trong những phương pháp khắc chế hiện tượng lạ này là cần sử dụng những hóa học nhỏng trimethylchlorosilan ClSi(CH3)3 hoặc hexamethyldisilazan (không nhiều thực hiện hơn) để can dự với nhóm –OH này (call là hiện tượng kỳ lạ end-capping). Trong thời điểm này ta sẽ có được loại cột không nhiều can hệ với chất so sánh bao gồm tính baz (cột LC-DB của hãng sản xuất SUPELCO).


*

Có một giải pháp không giống để loại bỏ bớt ảnh hưởng của group –OH nhưng không cần cửa hàng cùng với nó là cố gắng những nhóm methyl của –Si(CH3)2-C18 bằng rất nhiều nhóm cố to hơn như là isopropyl để đông đảo nhóm này vẫn che đi các đội –OH, ngăn trở thúc đẩy của nhóm –OH cùng với hóa học bắt buộc phân tích.

Xem thêm: Cách Cắm Tai Nghe Vào Máy Tính Ở Đâu, Cách Để Kết Nối Tai Nghe Với Máy Tính (Kèm Ảnh)


*

Người ta còn ghnghiền lên dây C18 một vài nhóm phân rất để tạo thêm độ phân rất của dây C18, làm cột có công dụng tách chọn lọc hơn đối với mọi thích hợp chất phân cực mạnh khỏe (cột EPS – Expended Polar Selectivity).Ngoài sườn silica, thời hạn cách đây không lâu fan ta có thực hiện đến nền nhựa polystyren (Polystyren Reversed Phase – PRP) cho phép so với vào môi trường thiên nhiên pH từ một – 13. Cột này dễ dàng áp dụng trong môi trường acid với baz bạo gan. 4. Pha cồn vào sắc ký trộn đảo Pha rượu cồn trong sắc đẹp ký lỏng nói chung đề nghị đạt đều thử dùng sau: Hòa tung mẫu mã phân tích. Phù phù hợp với đầu dò. Không hòa tan giỏi làm cho mòn pha tĩnh. Có độ nhớt phải chăng để tách áp suất dội lại cao. Tinh khiết cần sử dụng cho sắc ký kết (HPLC grade).

Trong sắc ký trộn đảo, dung môi trộn hễ có độ phân cực cao. Trên triết lý bạn có thể sử dụng không hề ít dung môi tuy vậy kinh nghiệm thực tiễn cho thấy thêm methanol (MeOH), acetonitrile (ACN) và tetrahydrofuran (THF) là đã đạt được hưởng thụ nhất. Nước là 1 trong những dung môi được cho vô những dung môi cơ học để bớt tài năng rửa giải.Mỗi dung môi phần đa đặc trưng vì chưng các hằng số đồ lý nlỗi chỉ số khúc xạ (refractive sầu index), độ nhớt (viscocity), ánh nắng mặt trời sôi (boiling point), độ phân rất (polarity index), độ cọ giải (eluent strength)…Trong số đó độ phân rất cùng độ cọ giải bao gồm ảnh hưởng tác động phệ lên khả năng phân tách bóc của những mũi dung nhan cam kết.


Có tía thông số gây tác động lớn mang lại bóc những mũi sắc đẹp ký: số đĩa kim chỉ nan N, thông số dung lượng K’, độ tinh lọc α . Khi sự thay đổi yếu tắc pha cồn không đưa về tác dụng bóc tách mũi theo thưởng thức thì bọn họ phải chuyển đổi thực chất pha động (sử dụng dung môi khác), tức đổi khác α. thường thì rất có thể nên thay đổi cả trộn tĩnh.Trong quy trình tách bóc của SKPĐ, sự ảnh hưởng thân vừa lòng chất cần so với cùng pha hễ phụ thuộc vào rất nhiều vào moment lưỡng rất, tính acid (mang lại proton) hoặc tính baz (dấn proton) của dung môi.Đôi khi pha đụng vào SKPĐ gồm một tất cả hổn hợp nước hoặc hỗn hợp đệm với một hoặc các dung môi hữu cơ phân rất rã được trong nước. Nước là một dung môi vô cùng phân cực vì thế nó ko can dự với phần đông nhóm alkyl không phân rất vào pha tĩnh, cho nên vì thế nó được xem nlỗi trộn động yếu độc nhất cùng có vận tốc cọ giải muộn nhất vào tất cả những dung môi rượu cồn của SKPĐ.Hỗn phù hợp nước và dung môi cơ học thường có tác dụng gia tăng độ nhớt dẫn tới việc tăng áp suất cột.


Việc tuyển lựa dung môi với thành phần dung môi trong trộn rượu cồn được về tối ưu hóa mang đến số đông phù hợp chất phải so sánh. Đôi khi, fan ta sử dụng tất cả hổn hợp dung môi MeOH/nước trước, rồi ACN/nước tốt THF/nước. Với một hỗn hợp hóa học so với phức hợp thì sẽ sở hữu được sự pha trộn của những dung môi cơ học cùng với nước. Lúc lựa chọn thì cần lựa chọn các tất cả hổn hợp MeOH, Acông nhân cùng THF cùng với nước tất cả độ rửa giải tương đồng.Thành phần pha động có thể cố định trong veo quy trình chạy dung nhan ký (chế độ isocratic) hoặc được biến hóa theo một chương trình đã định sẵn (chương trình gradien dung môi) để sở hữu kết quả bóc giỏi hơn.5. Một số đại lượng cơ bản vào so sánh sắc đẹp ký5.1. Hệ số phân bốCân bằng của một cấu tử X vào hệ sắc cam kết có thể được thể hiện bởi pmùi hương trình như sau:

Hằng số cân đối K cho cân bằng này được hotline là tỉ lệ phân bố tốt hằng số phân bố (partition coefficient) và được tính nhỏng sau:


Với CS : độ đậm đặc cấu tử vào pha tĩnh.CM : mật độ cấu tử trong trộn động.Hệ số K tùy trực thuộc vào bản chất trộn tĩnh, trộn động với hóa học so sánh.5.2. Thời gian lưu:tR : thời gian lưu giữ của một cấu tử tự khi vào cột cho đến lúc tách ra ngồi cột.tO : thời gian để cho chất như thế nào đó không tồn tại ái lực với trộn tĩnh đi qua cột; này cũng là thời hạn pha động đi từ trên đầu cột mang lại cuối cột cùng còn gọi là thời gian lưu giữ chết.tR" : thời hạn giữ thật của một cấu tử.

Với VS :thể tích pha tĩnhVM :thể tích pha độngNếu k’~ 0, tR~ tO: hóa học ra khôn xiết nkhô hanh, cột ko có khả năng giữ chất lại.Nếu k’ càng to (tR càng lớn): hóa học sống vào cột càng thọ, thời hạn so với càng lâu, mũi có khả năng bị tầy.Khoảng k’ lý tưởng là 2-5, tuy thế Lúc đối chiếu một các thành phần hỗn hợp phức tạp, k’ rất có thể đồng ý trong tầm rộng 1-20.

Xem thêm: " Kiêu Hùng Là Gì ? Nghĩa Của Từ Kiêu Hùng Trong Tiếng Anh Nghĩa Của Từ Kiêu Hùng Trong Tiếng Việt

5.4. Hiệu năngHiệu năng tuyệt số đĩa định hướng N của cột đặc trưng đến khả năng bóc tách mũi sắc ký kết của các cấu tử trên cột. N càng Khủng, hiệu năng tách bóc càng cao. Số đĩa triết lý hoàn toàn có thể đo bên trên nhan sắc cam kết đồ dùng. Người ta chứng minh được:


Với W50% là chiều rộng mũi nhan sắc ký kết tại đoạn ½ chiều cao mũi (phút)W là chiều rộng mũi sắc ký kết tại phần lòng mũi (phút)5.5. Độ lựa chọn lọcnổi bật mang lại khả năng bóc tách nhì chất của cột.


5.6. Độ phân giải:Đây là đại lượng biểu lộ rõ cả cha tài năng của cột dung nhan ký: sự giải hấp, sự tinh lọc cùng tác dụng bóc. Nó được xác định qua pmùi hương trình sau:


Chuyên mục: Hỏi Đáp